化学发光免疫技术 你了解吗？

免疫学检测主要是利用抗原和抗体的特异性反应进行检测的一种手段。由于其可以利用同位素、酶、化学发光物质等对其检测信号进行放大和显示，因此常被用于检测蛋白质，激素等微量物质。免疫分析经历了放射免疫检验，荧光免疫检验，酶联免疫（ELISA）检验等不同时期。化学发光免疫检验是免疫分析发展的一个新阶段，它环保快速、准确的特点已得到人们的普遍认识。因此化学发光免疫分析是通往免疫检验完美境界的必经之路。

 

化学发光免疫分析技术原理

化学发光免疫分析（Chemiluminesence immunoassay ,CLIA）是将化学发光或生物发光体系与免疫反应相结合，用于检测微量抗原或抗体的一种新型标记免疫测定技术。化学发光是在常温下由化学反应产生的光的发射。其机制为某些化合物（发光剂或发光底物）可以利用一个化学反应产生的能量使其产物分子或反应中间态分子上升至电子激态。当此产物分子或中间态分子衰退至基态时，以发射光子的形式释放能量（即发光）。免疫测定是利用抗原抗体反应来测定标本中微量物质的方法。

 

化学发光免疫检测原理

1.使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。

2.使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。

3.洗涤后加入发光底物，酶促使发光底物发光，通过专用的仪器检测光子的数量，从而换算出未知抗原或抗体的浓度。

化学发光与酶免的对比

 

化学发光与酶免的对比

酶免原理

1.使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。

2.使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。

3.洗涤后加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅定性或定量分析。

化学发光免疫检测的灵敏度与可测范围远远高于酶免，兼具ELISA法简便的操作方法与较短的反应时间。

化学发光与酶免的对比表

 

化学发光免疫分析的优点

1.灵敏度高：这是CLIA关键的优越性，其灵敏度可达 1016mol/L，化学发光底物可检测出的碱性磷酸酶的浓度比显色底物要灵敏五十万倍。

2.宽的线性动力学范围：发光强度在4-6个量级之间与测定物质浓度间呈线性关系。这与显色的酶免疫分析吸光度（OD值）为2.0的范围相比，优势明显。

3.光信号持续时间长：可达数小时甚至一天，简化了实验操作及测量。

4.分析方法简便快速：绝大多数分析测定均为仅需加入一种试剂（或复合试剂）的一步模式。

5.结果稳定、误差小：样品系直接自己发光，不需要任何光源照射，免除了各种可能因素（光源稳定性、光散射、光波选择器等）给分析带来的影响，使分析结果灵敏稳定可靠。

 

 

综合以上优点，化学发光免疫分析方法已成为临床免疫诊断的支柱方法，普遍用于多种临床检验项目的检测，包括激素，肿瘤标志物，蛋白、病原体感染抗体等等，并且有广阔的发展前景。